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Ⅱ. 형질전환동물 생산 방법의 개요 

 

 

외래 유용유전자의 도입에 의한 형질전환동물 생산기법은 아래와 같다. 

 

Microinjection법 : 1세포기 수정란의 웅성전핵에 micropipet을 사용하여 DNA 용액을 직접 미세주입하는 방법을 말한다. 이 방법을 이용하기 위해서는 포유동물 수정란의 채취, 체외배양 및 이식 등의 기술과 미세조작기 (micromanipulator)를 완벽하게 다룰 수 있는 고도의 숙련된 기술이 필요하지만, DNA 삽입이 잘 되며 후손에의 transmission도 용이하다. 이 방법은 현재 가장 널리 이용되고 있으며 필자 등도 이와 동일한 방법으로 양호한 결과를 얻고 있다. 

 

Retrovirus infection법 : 재조합 retrovirus를 생산하고 있는 세포와 발생초기단계 (주로 8세포기)의 배를 함께 배양하여 감염시키는 방법으로, 감염조작 그 자체는 용이하지만 재조합 retrovirus를 만드는 것이 까다롭다. 이 방법은 retrovirus의 배에의 감염 및 숙주 DNA에의 삽입이 2세포기 이후가 아니면 성립되지 않으며, 형질전환 동물의 출현빈도가 매우 낮으므로 일반적으로는 잘 이용되지 않고 있다. 

 

Embryonic stem cell법 : 전능성을 가진 embryonic stem cell (ES 세포)을 이용하는 방법이다. ES 세포는 in vitro에서 유지되므로 미리 돌연변이나 유전자 도입을 해둔다. 이처럼 처리된 ES 세포를 정상적인 배반포기의 배에 주입시켜, 소위 주입 키메라를 만든다. ES 세포가 생식세포로 분화되면 다음 세대에서 형질전환 동물을 얻을 수가 있다. 그러나, 생쥐에서는 키메라를 얻을 수는 있지만 생식세포로 분화되기 어려우며, 가축에 있어서는 세계적으로 겨우 몇 group의 연구실에서 ES 세포주가 수립되었다는 보고가 있을 뿐이다. 이 방법의 장점으로는 ES 세포를 이용하여 상동유전자 재조합 (homologous recombination)을 일으킬 수 있으므로 원하는 곳에 유전자를 도입하는 gene targeting이 가능하다는 것을 들 수 있다. 

 

 

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