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Index & Contents
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[목차]
1. 실험 제목 : PCR의 원리
2. 실험 목적
3. 이론 및 원리
(1) PCR(Polymerase Chain Reaction, 중합효소 연쇄반응)
1) 원리
2) 방법
3) 프라이머(Primer)
4) DNA 중합효소
5) PCR의 이용
(2) 전기영동(Electrophoresis)
1) 전기영동의 원리
2) 전기영동의 매질
3) 전기영동의 기구
4) 전기영동의 다양성
5) 전기영동의 방법
6) 핵산의 검출
4. 실험방법
5. 실험기구 및 시약
6. 참고문헌
1. 실험 제목 : PCR의 원리
2. 실험 목적 : PCR 실험을 통해 PCR과 전기영동의 이론과 사용법에 대하여 이해할 수 있도록 한다.
3. 이론 및 원리
(1) PCR(Polymerase Chain Reaction, 중합효소 연쇄반응)
1) 원리
PCR은 비교적 새로운 기술인데 매우 간단하면서 감도가 높고 응용범위가 넓어 현대생명과학에서 가장 중요한 테크놀로지 중의 하나로 자리잡았다. PCR은 1980년대 중반에 Kary Mullis에 의해 고안되었다. 이는 DNA 염기서열 분석법과 마찬가지로 유전자 연구와 분석에 새로운 접근을 가능하게 했다. PCR은 DNA 중합효소의 반응 즉 DNA 복제가 연쇄적으로 일어나는 반응이다. 그러나 세포에서의 복제같이 염색체가 전부 복제되는 것은 아니고 좁은 장소, 한 군데 정해진 곳에서만 일어난다. 그러니까 특정 염기순서만 거듭 복제되는 반응이 된다.
PCR 반응은 주형 DNA, DNA 중합효소, 복제지점을 정하는 프라이머(primer) 그리고 DNA 합성의 재료인 뉴클레오타이드(nucleotide), 이 네 가지 요소를 필요로 한다. PCR의 시작 재료는 증폭할 서열을 지닌 DNA이다. PCR을 할 DNA는 종종 세포로부터 추출한 총 genome DNA가 된다. 그러나 PCR은 순수 분리한 DNA를 요구하지 않는다. 또한 세포를 끓여서 얻은 정제를 하지 않은 DNA도 사용될 수 있다. 반응에 사용되는 프라이머에 의해 제한되므로 증폭되어질 서열을 분리할 필요는 없다. PCR에 사용될 DNA의 양은 극히 미량이다. 일반적 실험에서는 전체 genome DNA 인 경우 ㎍정도 이하로써도 충분하나 PCR은 한 개의 DNA 분자로부터 염기서열을 증폭할 수 있다. DNA 합성의 개시점을 나타내는 두 개의 올리고뉴클레오타이드 프라이머, DNA 중합효소, 4종류의 디옥시뉴클레오타이드 전구체의 혼합물을 DNA가 있는 시험관 내에 넣는데 총량은 보통 100㎍이 된다. 프라이머는 인공적으로 합성된 단일나선의 짧은 DNA인데 프라이…(생략)
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